本发明提供一种CCK8检测试剂盒及其应用，所述CCK8检测试剂盒包括添加因子一和添加因子二；所述添加因子一包括以下终浓度的组分：透明质酸酶0.5‑1mg/mL，EDTA 0.1‑0.5mg/mL，盐酸0.02‑0.05mol/L；所述添加因子二包括以下终浓度的组分：wst‑8 0.08‑0.2mg/mL，1‑Methoxy PMS0.05‑0.3mg/mL，钙盐0.1‑0.5mg/mL；所述添加因子一和所述添加因子二的溶剂均为无菌水。该试剂盒应用在类器官药敏活力检测中，反应时间短，准确性和重复性方面优于一般的CCK8药敏检测方法。