本发明提供一种烟草青枯病菌快速免疫检测试纸条及其制备方法和应用，属于生物检测技术领域。所述试纸条包含抗烟草青枯病菌单克隆抗体，其中，所述抗烟草青枯病菌单克隆抗体的重链可变区包含如SEQ ID NO.1所示的氨基酸序列，其轻链可变区包含如SEQ ID NO.2所示的氨基酸序列。本发明通过对现有检测烟草青枯病菌的胶体金试纸条进行改良优化，从而成功制备得到一种具有特异性强、灵敏度高、操作简便、反应快速等优点的烟草青枯病菌快速免疫检测试纸条，因此具有良好的实际应用之价值。