一种辣根过氧化物酶标记的单克隆抗体2B4的制备方法，本发明涉及一种单克隆抗体2B4的制备及应用。本发明解决了现有制备BHV‑1的单克隆抗体，都没有酶或荧光物标记物，导致检测的时候还需要加入标记的二抗的问题。方法：一、重组gD蛋白的制备；二、免疫小鼠；三、制备2B4单克隆抗体；四、辣根过氧化物酶标记。本发明制备的辣根过氧化物酶标记的单抗2B4既能识别牛疱疹病毒I型又能定位其gD囊膜蛋白，具有较高的特异性，可以直接检测出结果，不需要再加入二抗，具有简化操作步骤、节约时间、节约成本的特性。