公开(公告)号：CN112062820B

公开(公告)日：2023-05-26

申请号：CN202010854423.5

申请日：2020-08-24

申请人： 黑龙江八一农垦大学

发明人： 崔玉东 ,  肖雪

IPC分类号： C07K14/245 ,  C07K1/22 ,  C07K1/34 ,  C07K1/36 ,  C07K1/14

摘要： 本发明涉及一种大肠杆菌重组外膜蛋白A包涵体蛋白的复性纯化方法，该方法包括以下步骤：(1)诱导表达的rOmpA包涵体蛋白沉淀的收集；(2)rOmpA包涵体蛋白用8M尿素溶液变性；(3)用含15mMβ‑环糊精、pH8.5的100mM Tris‑HCl缓冲液进行5倍稀释复性；(4)复性的rOmpA亲和层析纯化；(5)纯化的rOmpA置透析袋中，于pH7.6的PBS缓冲液中4℃透析12h以上，离心后收集上清，即获得纯化的复性rOmpA蛋白。本发明对表达的rOmpA包涵体蛋白进行复性和纯化，可获得纯度高达95％的可溶性rOmpA蛋白；本发明使用的复性方法简便快捷，有效解决了大肠杆菌rOmpA包涵体蛋白的复性纯化问题，为大规模生产利用rOmpA降低成本。

公开(公告)号：CN113278065A

公开(公告)日：2021-08-20

申请号：CN202110366454.0

申请日：2021-04-06

申请人： 黑龙江八一农垦大学

发明人： 宋佰芬 ,  王北艳 ,  宋丽 ,  翟璐 ,  崔玉东 ,  马金柱 ,  于永忠

IPC分类号： C07K16/08 ,  C12N5/20 ,  G01N33/535 ,  G01N33/569 ,  G01N33/577

摘要： 一种辣根过氧化物酶标记的单克隆抗体2B4的制备方法，本发明涉及一种单克隆抗体2B4的制备及应用。本发明解决了现有制备BHV‑1的单克隆抗体，都没有酶或荧光物标记物，导致检测的时候还需要加入标记的二抗的问题。方法：一、重组gD蛋白的制备；二、免疫小鼠；三、制备2B4单克隆抗体；四、辣根过氧化物酶标记。本发明制备的辣根过氧化物酶标记的单抗2B4既能识别牛疱疹病毒I型又能定位其gD囊膜蛋白，具有较高的特异性，可以直接检测出结果，不需要再加入二抗，具有简化操作步骤、节约时间、节约成本的特性。

公开(公告)号：CN102707054B

公开(公告)日：2014-11-05

申请号：CN201210199910.8

申请日：2012-06-18

申请人： 黑龙江八一农垦大学

发明人： 崔玉东 ,  佟春玉 ,  马金柱 ,  朱战波

IPC分类号： G01N33/569 ,  G01N33/531

摘要： 本发明提供了一种大肠埃希氏菌OmpT抗体间接ELISA检测方法，所述的ELISA中酶标板上的检测抗原为OmpT重组蛋白。检测方法包括以下步骤：待检血清按照1:640稀释后，与酶标板上的OmpT重组蛋白37℃孵育1.5h，洗板三次；加入辣根过氧化物酶标的兔抗牛lgG与待检血清37℃孵育1.5h；加入TMB底物进行显色10min；终止反应后检测OD450，OD450值≥0.335为阳性，OD450值＜0.335为阴性。本发明用大肠埃希氏菌的标志性基因OmpT制备的重组蛋白作为ELISA的检测抗原，该重组抗原可规模化、标准化生产，且特异性强，适于大肠埃希氏菌属所有血清型细菌感染后抗体检测。

公开(公告)号：CN104072617A

公开(公告)日：2014-10-01

申请号：CN201310289361.8

申请日：2013-07-10

申请人： 黑龙江八一农垦大学

发明人： 闻晓波 ,  张艳 ,  冉旭华 ,  魏晓曼 ,  崔玉东 ,  朱战波 ,  张春山

IPC分类号： C07K19/00 ,  C12N15/62 ,  C12N15/70 ,  A61K39/15 ,  A61P31/14

摘要： 本发明涉及猪轮状病毒ΔVP8亚单位重组嵌合蛋白及其应用，所述重组嵌合蛋白是由破伤风毒素T细胞表位多肽P2以及猪轮状病毒Gottfried株VP8亚单位的截短形式（Gottfried-ΔVP8）和猪轮状病毒OSU株VP8亚单位的截短形式（OSU-ΔVP8）嵌合而成，且在破伤风毒素T细胞表位多肽P2、Gottfried-ΔVP8和OSU-ΔVP8之间通过柔性Linker连接，有助于重组嵌合蛋白的正确折叠，提高可溶性蛋白产量。本发明提供的猪轮状病毒ΔVP8亚单位重组嵌合蛋白可诱导高滴度的抗类Gottfried型(G4P[6])或类OSU型(G5P[7]基因型特异的轮状病毒中和抗体，表明该重组嵌合蛋白具有优良的免疫原性，且该可溶性重组嵌合蛋白的产量高（实验室常规制备可达20mg/L以上），适合于工业化生产以及大批量新型猪轮状病毒疫苗的制备。

公开(公告)号：CN103436550A

公开(公告)日：2013-12-11

申请号：CN201310319778.4

申请日：2013-07-26

申请人： 黑龙江八一农垦大学

发明人： 朱战波 ,  姜东君 ,  于立权 ,  崔玉东 ,  王鹤 ,  梁宏儒 ,  赵达 ,  胡旭 ,  高佳滨 ,  陈为宏 ,  尹辉 ,  乔波 ,  陈楠楠

IPC分类号： C12N15/70 ,  C12N15/66 ,  C12N1/21 ,  C12R1/19

摘要： 本发明提供了一种菌影载体，所述菌影载体包含锚定基因E’、巴氏杆菌OmpH基因、裂解盒（pBV220-E从阻遏蛋白到终止子的全部序列）和质粒载体pET28a。所述菌影载体中的裂解盒（ci857-E-T1T2）独立存在于pET28a的非多克隆位点区，与pET28a原有的表达系统形成两个独立的表达系统，且方向相反，便于在pET28a的多克隆位点区插入目的蛋白基因，蛋白表达时不会影响目的蛋白的构象，且不易发生通译现象。

公开(公告)号：CN102276730A

公开(公告)日：2011-12-14

申请号：CN201110231144.4

申请日：2011-08-12

申请人： 黑龙江八一农垦大学

发明人： 崔玉东 ,  朱战波 ,  王宁 ,  马金柱 ,  迟佳琦

IPC分类号： C07K19/00 ,  C12N15/62 ,  C12N15/63 ,  C12N1/21 ,  A61K39/085 ,  A61P31/04 ,  C12R1/445 ,  C12R1/19

摘要： 本发明提供了一种金黄色葡萄球菌IsdBid-TRAP融合蛋白，其氨基酸序列如SEQ ID No.1所示。本发明融合蛋白的制备方法包括金黄色葡萄球菌IsdB免疫优势片段(IsdB immunodominant fragment，IsdBid)的选择和采用重叠引物延伸PCR技术将IsdBid与trap基因用Linker连接起来，并将IsdBid-TRAP融合蛋白基因进行原核表达，然后纯化该融合蛋白。利用本发明的IsdBid-TRAP融合蛋白制备得到的疫苗免疫小鼠后，经检测该融合蛋白疫苗的免疫效果明显优于IsdB和TRAP单独免疫以及IsdB与TRAP混合在一起免疫的免疫效果，是制备金黄色葡萄球菌疫苗理想的候选抗原。

公开(公告)号：CN108635576B

公开(公告)日：2020-09-29

申请号：CN201810860249.8

申请日：2018-08-01

申请人： 黑龙江八一农垦大学

发明人： 马金柱 ,  崔玉东 ,  刘伟 ,  宋佰芬 ,  于立权 ,  佟春玉 ,  于永忠 ,  冯振月

IPC分类号： A61K39/39 ,  A61K39/085 ,  A61P31/04 ,  A61P37/04

摘要： 本发明公开了一种免疫联合佐剂及其制备方法与应用，属于兽用生物制品及其制备方法。该制剂由遴选的三种成分：CpG‑ODN、MDP、FIA制备而成，其免疫佐剂活性强，靶向性强，安全，能高效提高抗原免疫效果。

公开(公告)号：CN105384800B

公开(公告)日：2019-01-25

申请号：CN201510889714.7

申请日：2015-12-07

申请人： 黑龙江八一农垦大学

发明人： 于立权 ,  崔玉东 ,  刘道龙

IPC分类号： C07K14/31 ,  C07K19/00 ,  C12N15/31 ,  C12N15/62 ,  A61K39/085 ,  A61P31/04

摘要： 本发明涉及一种金黄色葡萄球菌FnBPA免疫优势片段，并且提供了该免疫优势片段的编码基因。本发明还涉及了一种含有金黄色葡萄球菌FnBPA免疫优势片段的融合蛋白，是由金黄色葡萄球菌的TRAP蛋白、α‑溶血素免疫优势片段和金黄色葡萄球菌FnBPA免疫优势片段融合而成，并且提供了该融合蛋白的编码基因、制备方法以及用途。利用本发明的TAF融合蛋白对小鼠免疫攻毒试验，表明TAF融合蛋白具有较好的免疫保护性效果，是金黄色葡萄球菌的理想疫苗抗原，在新型疫苗的开发应用方面具有重要的价值。

公开(公告)号：CN105254719B

公开(公告)日：2018-07-13

申请号：CN201510689086.8

申请日：2015-10-21

申请人： 黑龙江八一农垦大学

发明人： 崔玉东 ,  姚笛 ,  于立权 ,  马金柱

IPC分类号： C07K7/08 ,  A61K38/10 ,  A61K39/085 ,  A61P31/04

摘要： 本发明涉及金黄色葡萄球菌TRAP蛋白的CD4+T细胞表位，氨基酸序列如SEQ NO:1和SEQ NO:2所示。该表位产生了较强的TRAP抗原特异性的CD4+T细胞增值，同时分泌了高水平的细胞因子IFN‑γ和IL‑17，暗示筛选的两个TRAP优势表位属于Th1和Th17型，且SEQ NO:2特异性CD4+T细胞分泌的IL‑17高于TRAP全蛋白。本发明还提供了两种TRAP蛋白的CD4+T细胞表位和TRAP蛋白的B细胞表位串联而成的重组表位疫苗PT，该疫苗产生了特异性的细胞免疫应答和体液免疫应答，且对于金黄色葡萄球菌感染的保护效果高于TRAP全蛋白，因此该表位可应用于金黄色葡萄球菌疫苗的开发。

公开(公告)号：CN104072617B

公开(公告)日：2016-09-21

申请号：CN201310289361.8

申请日：2013-07-10

申请人： 黑龙江八一农垦大学

发明人： 冉旭华 ,  闻晓波 ,  倪宏波 ,  张旭 ,  魏晓曼 ,  崔玉东 ,  张春山

IPC分类号： C07K19/00 ,  C12N15/62 ,  C12N15/70 ,  A61K39/15 ,  A61P31/14

摘要： 本发明涉及猪轮状病毒ΔVP8亚单位重组嵌合蛋白及其应用，所述重组嵌合蛋白是由破伤风毒素T细胞表位多肽P2以及猪轮状病毒Gottfried株VP8亚单位的截短形式（Gottfried‑ΔVP8）和猪轮状病毒OSU株VP8亚单位的截短形式（OSU‑ΔVP8）嵌合而成，且在破伤风毒素T细胞表位多肽P2、Gottfried‑ΔVP8和OSU‑ΔVP8之间通过柔性Linker连接，有助于重组嵌合蛋白的正确折叠，提高可溶性蛋白产量。本发明提供的猪轮状病毒ΔVP8亚单位重组嵌合蛋白可诱导高滴度的抗类Gottfried型(G4P[6])或类OSU型(G5P[7]基因型特异的轮状病毒中和抗体，表明该重组嵌合蛋白具有优良的免疫原性，且该可溶性重组嵌合蛋白的产量高（实验室常规制备可达20mg/L以上），适合于工业化生产以及大批量新型猪轮状病毒疫苗的制备。