本发明提供了一种定量检测机体中mRNA含量的实时荧光定量PCR试剂盒及检测方法和应用，涉及mRNA检测技术领域。本发明所述试剂盒建立在RT‑PCR基础上，以mRNA作为标准品构建标准曲线，稀释的系列标准品溶液通过与待测样本同样的反转录、qPCR过程，更好的模拟样本检测过程，直观展示mRNA药物含量，减少质粒的构建工作，实现了生物样本中mRNA药物的快速、准确的定量检测，具有操作简单、灵敏度高、检测范围宽，特异性强等优点，可用于mRNA类药物临床前药物生物分布研究、临床研究生物样品检测和临床治疗患者的药物分布监测。