本发明提供了一种重组蛋白、重组表达载体、重组细胞和NK细胞激活磁珠及其制备方法和应用，涉及NK细胞激活扩繁技术领域。本发明将单链抗体和Streptag2标签进行融合，结构简单，使得重组表达载体或重组细胞表达出的抗体，无需进行生物素化修饰就可直接与磁珠进行组装，且组装后的磁珠可以直接作为NK细胞的扩增刺激物，可以有效的扩增NK细胞。本发明所述NK细胞激活磁珠的结合能力高达97％以上，二者的特异性高；利用所述NK细胞激活磁珠激活培养得到NK细胞系与滋养细胞法激活培养的NK细胞的杀伤效率无明显区别。