本发明属于医药生物技术领域，具体公开了一种用于贲门癌诊断的标志物及试剂盒。本发明提供的用于贲门癌诊断的标志物为3,4‑Dihydroxybenzeneacetic Acid、1,5‑Anhydro‑D‑Glucitol、3‑Methylxanthine中的至少一种，该标志物的检测试剂能够用于制备贲门癌诊断产品。本发明还提供一种用于贲门癌诊断的试剂盒，该试剂盒含有检测上述第一方面所述标志物的检测试剂，检测试剂为通过色谱法质谱法或色谱‑质谱联用法检测样本中的所述标志物的试剂。本发明通过检测人血清中3,4‑Dihydroxybenzeneacetic Acid、1,5‑Anhydro‑D‑Glucitol、3‑Methylxanthine的表达水平，可以有效检测贲门癌，其检测灵敏度高达90.0%，特异性达到了91.0%，可用于贲门癌高发区无症状人群的大规模筛查，有利于无症状高危人群筛查和早期发现。