本发明公开了一种α亚基突变的腈水合酶突变体及其应用。本发明通过蛋白质分子改造，显著提高了源于博得特氏菌DSM 12804(Bordetella petrii DSM12804)的腈水合酶在基因工程菌E.coli BL21(DE3)中活性表达能力。以丙烯腈为底物，本发明的腈水合酶突变体的催化活力显著提高，单位LB摇瓶发酵液的酶活最高为突变体NHAB‑A2M，为初始型NHAB的1.7倍；突变体NHAB‑A14M的酶活提高了1.4倍，其热稳定性更是显著提高，在45℃条件下热处理1h后，残余酶活为78％，是野生型的4.8倍。