本发明公开了一种葡萄球菌蛋白A、纯化制备方法及其应用，本发明主要涉及通过基因工程改造的蛋白ProteinA基因连入表达载体来构建重组质粒，导入原核宿主细胞中进行表达，经Ni亲和和离子交换层析纯化，可获得纯度大于95％的目的蛋白。本发明纯化制备方法具有纯化工艺简便、收率高等特点。同时制备的ProteinA具有良好的免疫球蛋白IgG结合力、耐碱性和热稳定性。并且固相载体偶联ProteinA制备的亲和介质具有吸附IgG效果佳、载样量高和耐碱性的优点。本发明制备的ProteinA蛋白及其偶联制备的介质在单克隆抗体纯化领域和免疫诊断研究上均能起到重要的作用。