本发明属于医药生物技术领域，具体公开了一种食管鳞癌诊断的标志物及试剂盒。本发明提供的用于食管鳞癌诊断的标志物为S‑磺基‑L半胱氨酸、对称性二甲基精氨酸、4‑甲氧基苯乙酸中的至少一种，该标志物的检测试剂能够用于制备食管鳞癌诊断产品。本发明还提供一种用于食管鳞癌诊断的试剂盒，该试剂盒含有检测上述标志物的检测试剂，检测试剂为通过色谱法质谱法或色谱‑质谱联用法检测样本中的所述标志物的试剂。本发明通过检测人血清中S‑磺基‑L半胱氨酸、对称性二甲基精氨酸、4‑甲氧基苯乙酸的表达水平，可以有效检测食管鳞癌，其检测灵敏度高达80%，特异性达到71%，可用于食管鳞癌高发区无症状人群的大规模筛查，有利于无症状高危人群筛查和早期发现。