本发明公开了产乙偶姻的大肠杆菌工程菌及构建方法与在全细胞催化生产乙偶姻的应用，产乙偶姻的大肠杆菌工程菌，其构建方法为通过共表达α‑乙酰乳酸合成酶、α‑乙酰乳酸脱羧酶、乳酸脱氢酶和NADH氧化酶，得到产乙偶姻的大肠杆菌工程菌；构建大肠杆菌工程菌中使用的宿主菌为突变型大肠杆菌BL‑2，本发明是以乳酸为底物生产乙偶姻，产品产量高，底物成本低，且反应体系中无需额外添加NAD+，进一步降低了生产成本。本发明的方法，乙偶姻产量达到87.5mM以上，产率达到3.65mM/h以上，得率达到0.444mol/mol以上，即理论得率的88.8％以上。此方法的反应条件温和，过程简单。