本发明涉及化学对照品的制备和应用技术领域，具体涉及唐古特铁线莲中皂苷类化学对照品的分离制备工艺及其应用。具体制备工艺为提取、正丁醇粗富集、大孔树脂精细富集、高速逆流色谱分离及结构鉴定。本发明方法将大孔树脂和高速逆流色谱技术相结合，通过优化富集和分离条件，建立了唐古特铁线莲中7种结构类似的齐墩果烷型皂苷类化学对照品的高效分离制备工艺，操作简单、方便、易于实现自动化控制，具有重复性和稳定性好的优点，非常适合唐古特铁线莲中7种皂苷类化学对照品的制备，对于天然产物中皂苷类化学对照品的制备具有重要的参考价值。本发明提供的齐墩果烷型三萜皂苷类化学对照品可作为抗肿瘤药物的先导性化合物，有良好的应用前景。