本发明属于医药生物技术领域，具体公开了用于食管鳞癌辅助诊断的生物标志物。本发明提供的用于食管鳞癌诊断的生物标志物为抗肿瘤相关抗原MAGEA1、VCL、TP53、PRKCZ的自身抗体中的至少一种。本发明还提供一种用于食管鳞癌辅助诊断的试剂盒，该试剂盒含有用于检测上述生物标志物的试剂，所述试剂为通过酶联免疫吸附、蛋白芯片、免疫印迹或微流控免疫检测样本中所述生物标志物的试剂。本发明通过检测人血清中抗肿瘤相关抗原MAGEA1、VCL、TP53、PRKCZ的自身抗体的表达水平，可以有效区分食管鳞癌患者和正常人，可用于食管鳞癌的辅助诊断。