本发明公开了一种含有去蛋白骨的注射填充剂及其制备方法。该填充剂是由重组胶原蛋白‑去蛋白骨复合微球与含有交联透明质酸钠和重组胶原蛋白的凝胶混合而成，填充剂中的微球相是由动物源性骨组织颗粒经灭病毒、脱脂和脱细胞、去蛋白处理后粉粹并钝化成无棱角、外形不规则的微粒，再与重组胶原蛋白溶液乳化交联而制成，凝胶相由透明质酸钠和重组胶原蛋白通过交联后混入含或不含麻醉剂的磷酸盐缓冲液中而制成。本发明通过采用天然骨材料赋予了复合微球交联重组胶原蛋白外壳内去蛋白骨微粒结构优异的亲水性和相容性，同时经微球相和凝胶相混合而成的注射填充剂可以起到支持机体自身胶原再生的协调作用，为皮肤提供长效、安全的支撑作用。