本发明涉及生物缓冲剂技术领域，公开了一种三(羟甲基)甲基甘氨酸的制备方法，包括如下制备步骤：将化合物I与化合物A进行反应，得到化合物II；将上述的化合物II进行水解反应、氧化反应、酸碱处理反应中的至少一种反应，得到三(羟甲基)甲基甘氨酸粗品，经过纯化后，得到三(羟甲基)甲基甘氨酸精品。本发明的制备方法中使用的原料成本低，操作简单，获得的产品纯度较高，不仅提高了产品的产率和降低了产品的应用成本，所得的产品符合生物缓冲剂领域对其纯度、杂质含量、成本等的要求，而且该方法适合工业化生产，适合于在生物缓冲剂领域的应用。