一种松材线虫快速检测试纸卡及其制备和使用方法，包括卡壳和试纸条，试纸条底部为底板，底板上依次设置样品垫、金标垫、硝酸纤维素膜和吸水纸，所述的硝酸纤维素膜上设置C线和T线。制备方法包括制成标签抗体‑胶体金工作液，标签抗体金标垫，将标签抗体‑胶体金工作液涂覆在金标垫表面，使其构成标签抗体金标垫；将包被抗体工作液涂覆在硝酸纤维素膜的T线处，将羊抗鼠IgG二抗溶液涂覆在硝酸纤维素膜的C线处；使用方法是将液体状的待测样品滴加2～3滴于加样孔内，室温放置5～10min，观察C线处和T线处。本发明的方法操作简单，不需要专门的仪器设备，可方便的于林间等现场直接进行检测。