本发明属于唾液酸乳糖分离纯化领域，具体涉及一种高纯度3’‑唾液酸乳糖的分离纯化方法，包括对转化液进行加热灭酶过滤、调节滤液pH至碱性后过滤，将滤液的pH调节至中性、经浓缩、离子吸附、干燥等步骤，得到分离纯化的3’‑SL；本发明采用加热灭酶和调节pH至碱性两种方式综合提升转化液中蛋白等大分子物质的去除率，同时控制浓缩液中3’‑SL的浓度，对于阴阳离子吸附纯化进一步提高产物3’‑SL的纯度具有重要作用，综合上述方法获得的产物3’‑SL的纯度≥96％。