本发明涉及气相色谱‑四极杆质谱定量分析烟叶11种酰胺生物碱方法，通过氢氧化钠溶液浸泡使酰胺生物碱从烟末样品基质中游离出来，通过甲基叔丁基醚的萃取将目标化合物转入醚层，取甲基叔丁基醚萃取液浓缩后进行气相色谱‑四极杆质谱分析，将仪器获得的色谱峰面积输入对应的酰胺生物碱的标准校准曲线拟合方程，得到对应的目标化合物浓度，通过换算得到对应的酰胺生物碱在烟叶中的含量。该方法可同时定量分析11种酰胺生物碱，具有简单、快速、稳定等优势。填补了目前不存在定量分析烟叶中11种酰胺生物碱的方法的空白。