本发明提供一种新城疫病毒基因Ⅵ型疫苗株，是将将鸽源的基因Ⅵ型新城疫病毒的F基因进行致弱突变后，置换保藏编号为CCTCC NO:V201968的新城疫病毒株的F基因后遗传拯救构建的，且保藏编号为CCTCC NO:V201968的新城疫病毒株的HN蛋白的340位、342位、347位和353位氨基酸分别突变为组氨酸、天冬酰胺、赖氨酸和精氨酸。本发明还提供新城疫病毒基因Ⅵ型弱毒株NDV‑Ⅵb株在制备疫苗中的应用。本发明构建的基因Ⅵ型的新城疫病毒弱毒株的骨架病毒来源于改造后的基因Ⅶ型新城疫病毒弱毒株，安全可靠，减少毒力返强的风险；构建的基因Ⅵ型重组新城疫病毒弱毒株主要用于鸽子新城疫病毒的防控，而其F基因来源于宿主鸽子，比来源于鸡的基因Ⅵ型新城疫病毒株免疫原性更好。