本发明属于生物技术领域，尤其涉及一种生产PHB的自絮凝运动发酵单胞菌的构建方法及其应用。本发明以运动发酵单胞菌ZM4为出发菌株，首先利用基因工程手段引入外源PHB合成的三个必需基因phaA，phaB，phaC，与四环素诱导型启动子一起构成操纵子Ptet‑phaCAB，整合到ZM4基因组ZMO0038位置得到ZMPt菌株。然后敲除ZMPt菌株基因组上ZMO1082位置的特定核苷酸胸腺嘧啶得到ZMPt‑Flo絮凝菌株。最后依次在ZMPt‑Flo菌株引入pEZ‑PgN2，pE39p‑PeEUP质粒最终得到菌株ZMPt‑FloN2‑EUP。并进行了培养基优化，循环发酵实验生产乙醇及PHB。