本发明公开一种抗反馈抑制的新型透明质酸融合酶及其制备方法、酶切工艺，本发明首次将透明质酸结合蛋白编码基因和水蛭透明质酸水解酶编码基因在酵母中进行融合表达获得新型透明质酸融合酶。所述透明质酸结合蛋白与水蛭透明质酸水解酶通过由9个甘氨酸和丝氨酸的重复氨基酸序列形成的Linker连接，并融合有6个组氨酸序列作为标签。本发明新型透明质酸融合酶，其透明质酸结合蛋白部分可与底物透明质酸特异性结合，利于透明质酸水解酶部分的功能发挥，解决了透明质酸酶催化反应存在的反馈抑制问题，显著提高了酶切效率，具有良好的工业生产价值及经济价值。