本发明涉及一种幽门螺杆菌药敏检测方法，本发明采用微量肉汤稀释法，只需要两个48孔板便可以一次性检测一例临床分离菌株对多种抗菌药物的MIC值，极大提高了药敏检测效率，药敏结果与金标准即琼脂稀释法一致性较高，操作简便，而且药敏结果检测已实现半自动化；本发明的方法操作简单耗费少，与琼脂稀释法相比不需要配置大量的板子，梯度稀释的抗生素液体和培养基的加入可以由工作站完成，而且比E‑test试纸条成本低，药敏结果可以用酶标仪检测，通过染色液染色，结果直观可见。