本发明的硫酸多糖‑叶酸偶联物的制备方法，是将硫酸多糖充分溶于二甲基亚砜中，再将叶酸、二环己基碳二亚胺和4‑二甲氨基吡啶溶于无水二甲基亚砜中，在20~35℃、避光条件下加入的氮气冲洗搅拌20~40分钟，得到活化后的叶酸；再将上步骤得到的硫酸多糖溶液滴加到活化后的叶酸溶液中，滴加完成后持续搅拌6~24 h，待反应完成后，离心去除副产物，将上清液在35~50℃下磷酸盐缓冲液中透析2~3天后，再在用蒸馏水透析、通过离心除去过量的未反应的游离叶酸，再通过冻干获得硫酸多糖‑叶酸偶联物。本发明申请的硫酸多糖‑叶酸偶联物的制备方法，利用叶酸对癌细胞表面叶酸受体的特异性结合能力，实现硫酸多糖‑叶酸偶联物在活化自然杀伤细胞后对HeLa癌细胞的靶向杀伤能力。