本发明公开了抗体结合生物膜干涉技术的单增李斯特菌快速检测方法，包括以下步骤：一、传感器平衡；二、传感器活化；三、抗体固定化；四、一次封闭；五、二次封闭；六、样品检测及结果分析。本发明所述方法步骤少、无标记、实时监测、结果判断简单；操作简单易学，仅需要向样品板中添加配置好的试剂及制备好的样品即可上机检测，实时读取结合信号即可判断单增李斯特菌的存在；单增李斯特菌抗体可回收后重复使用，从而降低成本；配合相应的BLI系统，本发明可实现多个样品的同时检测；具有较好的特异性，可排除样品中非目标菌的干扰；检测时间短，根据样品中所含单增李斯特菌浓度的不同，单纯的样品检测环节只需要几分钟的时间。