本发明涉及一种质粒，其包括：编码温度敏感元件的基因；位于所述编码温度敏感元件的基因下游的能够通过所述温度敏感元件调控的操纵单元；位于所述操纵单元下游的表达目标蛋白的外源基因。本发明的质粒能够通过所述温度敏感元件调控的操纵单元调控目标蛋白的表达，当温度升高到给定温度时，所述温度敏感元件失活从而操纵单元启动表达目标蛋白，当温度低于给定温度时，所述温度敏感元件抑制操纵单元启动表达目标蛋白。本发明通过所述质粒进一步提供了一种温控无细胞合成体系的构建方法，实现了在无细胞体系中通过温度调控其中目标蛋白的表达。