本发明主要利用定点突变技术构建来源于特异腐质霉的β‑葡萄糖苷酶的突变体菌株，获得了一种葡萄糖耐受能力提高的β‑葡萄糖苷酶突变体T331Q，其氨基酸序列如SEQ ID NO：4所示。相同条件下，本发明突变体可在400mmol/L葡萄糖的激活下最高达到239.0％的相对活力，在葡萄糖浓度为1.5mol/L时，其相对活力仍能达到112.61％，具有良好的葡萄糖耐受能力。本发明中的突变体在生物燃料、食品保健和生物合成等领域具有较高的应用价值。