本发明公开了结核分枝杆菌LTBI‑RD相关蛋白抗原的CTL表位肽及其应用。具体地公开了10条CTL表位肽的氨基酸序列及其在活动性结核和潜伏性结核感染的鉴别诊断中的应用。本发明的CTL表位肽能够刺激ATB、LTBI以及UC组小鼠模型产生免疫应答，使得IFN‑γ+T淋巴细胞的绝对计数水平以及Th1/Th2/Th9/Th17/Th22/Treg相关细胞因子分泌水平在三组间存在显著差异，能够较好地在鉴别诊断ATB和LTBI。用上述CTL表位肽作为ATB和LTBI诊断标志物，与传统检测技术TST和IGRAs相比，具有制备方法简单、成本低、产量高、灵敏度和特异性更高等优点。