本发明公开了一种同时检测谷物中多种真菌毒素和重金属Cd的五联荧光免疫定量试纸条，属于免疫分析快速检测技术领域。本发明中制备五联荧光免疫定量试纸条的方法，包括如下步骤：分别将0.01‑1.0mg/mLAFB1、FB1、OTA、ZEN完全抗原溶液涂到NC膜上作为检测线T1～T4，将0.1‑1.0mg/mL Cd完全抗原溶液涂到NC膜上作为检测线T2，将0.05‑1mg/mL羊抗鼠二抗溶液涂到硝酸纤维素膜上作为质控线C，干燥；之后将样品垫、含有检测线、质控线的硝酸纤维素膜、吸水纸依次粘贴在PVC底板上组装成试纸条。本发明的五联荧光免疫定量试纸条可以实现在一张试纸条上同时检测谷物中多种真菌毒素和重金属Cd，并且具备灵敏度高、成本低廉、操作简便、快速定量检测、稳定性好的优点，具有良好的商业化应用前景。