本发明涉及分子生物学及代谢工程技术领域，具体涉及一种枯草芽孢杆菌工程菌及其构建方法和应用，构建方法包括如下步骤：步骤一、构建表达菌株BU12；步骤二、构建得到启动子PD8；步骤三、将表达菌株BU12中的级联信号分子PhrG和RapG的天然启动子替换为组成型启动子Phag，以构建得到BC01菌株；步骤四、将BC01菌株capB,C,A和racE的启动子中至少两种启动子替换为所述启动子PD8，构建得到枯草芽孢杆菌工程菌。采用本发明的枯草芽孢杆菌工程菌进行发酵调控培养，最终得到聚‑γ‑谷氨酸和D型谷氨酸单体含量皆较高，为拓宽聚‑γ‑谷氨酸在药物输送材料方面的市场应用奠定了坚实的基础。