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公开(公告)号：CN114250240B
公开(公告)日：2023-07-28
申请号：CN202111613081.9
申请日：2021-12-27
申请人： 安徽工程大学
摘要： 本发明涉及遗传工程技术领域，具体涉及一种调节大肠杆菌菌膜形态和高效合成MK‑7的方法，包括如下步骤：步骤一、以大肠杆菌BL21基因组为模板，构建得到△ispB菌株EC1；步骤二、以枯草芽孢杆菌168全基因组为模板，扩增得到hepT基因，通过与pET‑28a载体连接构建得到菌株EC2；步骤三、根据待突变LsrR的氨基酸位点来设计PCR点突变引物，以构建的重组质粒pET‑lsrR为模板，构建得到菌株EC3；步骤四、根据待突变lsrK的氨基酸位点来设计PCR点突变引物，构建得到用于高效合成MK‑7的菌株EC4。本发明通过调控大肠杆菌菌膜形态，促进大肠杆菌维生素K2的MK‑7高效合成。
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公开(公告)号：CN112921048B
公开(公告)日：2022-03-08
申请号：CN202110244068.4
申请日：2021-03-05
申请人： 安徽工程大学
摘要： 本发明提供了一种纳豆激酶工程菌及提高纳豆激酶活力的方法，包括如下步骤：步骤一、分别提取枯草芽胞杆菌与纳豆芽胞杆菌的基因组DNA；步骤二、以转录调控因子sinR和纳豆激酶编码基因aprN为目的基因，以枯草芽胞杆菌与纳豆芽胞杆菌的DNA为模板，分别设计第一引物对和第二引物对进行PCR扩增，以得到sinR PCR产物和aprN PCR产物；步骤三、以sinR PCR产物和aprN PCR产物构建串联sinR与aprN的重组质粒；步骤四、将重组质粒转化感受态细胞，以得到阳性克隆菌落；步骤五、对阳性克隆菌落依次进行种子培养基培养和发酵培养。本发明将群体感应调控因子与纳豆激酶编码基因串联表达，提高纳豆激酶含量及活力。
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公开(公告)号：CN116064633B
公开(公告)日：2024-06-11
申请号：CN202211370265.1
申请日：2022-11-03
申请人： 安徽工程大学
摘要： 本发明涉及遗传工程技术领域，具体涉及一种构建高效生物合成维生素K2工程菌的方法，包括如下步骤：步骤一、构建得到△pbuE菌株EC1；步骤二、以菌株EC1全基因组为模板，用PdegQ启动子序列替换枯草芽孢杆菌法呢基二磷酸合酶基因ispA的原始启动子，得到菌株EC2；步骤三、以菌株EC2全基因组为模板，敲除1‑脱氧木酮糖‑5‑磷酸合酶基因dxs，得到菌株EC3；步骤四、以克雷伯氏菌全基因组为模板，扩增得到dxs基因，通过与pHY‑P43载体连接转化至菌株EC3中，得到EC4。本发明通过启动子替换和关键基因优选构建高产MK‑7的枯草芽孢杆菌，最终菌株EC4的MK‑7产量较原始菌株提高了5.42倍。
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公开(公告)号：CN114231554B
公开(公告)日：2023-07-28
申请号：CN202111614876.1
申请日：2021-12-27
申请人： 安徽工程大学
摘要： 本发明涉及生物工程技术领域，具体涉及一种维生素K2系列产物的生物合成方法，包括如下步骤：步骤一、敲除Bacillus subtilis168基因中的hepS基因，得到△hepS菌株BS01；步骤二、敲除Bacillus subtilis168基因中的hepT基因，得到△hepT菌株BS02；步骤三、PCR扩增大肠杆菌yqiD基因或Bacillus subtilis168的hepT基因；将所得PCR产物连接表达载体pHY‑P43得到重组质粒，之后转到BS02，即得产生维生素K2系列产物的工程菌。该发明对于获取不同食品级维生素K2同系物具有十分重要的意义。
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公开(公告)号：CN114231554A
公开(公告)日：2022-03-25
申请号：CN202111614876.1
申请日：2021-12-27
申请人： 安徽工程大学
摘要： 本发明涉及生物工程技术领域，具体涉及一种维生素K2系列产物的生物合成方法，包括如下步骤：步骤一、敲除Bacillus subtilis168基因中的hepS基因，得到△hepS菌株BS01；步骤二、敲除Bacillus subtilis168基因中的hepT基因，得到△hepT菌株BS02；步骤三、PCR扩增大肠杆菌yqiD基因或Bacillus subtilis168的hepT基因；将所得PCR产物连接表达载体pHY‑P43得到重组质粒，之后转到BS02，即得产生维生素K2系列产物的工程菌。该发明对于获取不同食品级维生素K2同系物具有十分重要的意义。
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公开(公告)号：CN116064633A
公开(公告)日：2023-05-05
申请号：CN202211370265.1
申请日：2022-11-03
申请人： 安徽工程大学
摘要： 本发明涉及遗传工程技术领域，具体涉及一种构建高效生物合成维生素K2工程菌的方法，包括如下步骤：步骤一、构建得到△pbuE菌株EC1；步骤二、以菌株EC1全基因组为模板，用PdegQ启动子序列替换枯草芽孢杆菌法呢基二磷酸合酶基因ispA的原始启动子，得到菌株EC2；步骤三、以菌株EC2全基因组为模板，敲除1‑脱氧木酮糖‑5‑磷酸合酶基因dxs，得到菌株EC3；步骤四、以克雷伯氏菌全基因组为模板，扩增得到dxs基因，通过与pHY‑P43载体连接转化至菌株EC3中，得到EC4。本发明通过启动子替换和关键基因优选构建高产MK‑7的枯草芽孢杆菌，最终菌株EC4的MK‑7产量较原始菌株提高了5.42倍。
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公开(公告)号：CN114250240A
公开(公告)日：2022-03-29
申请号：CN202111613081.9
申请日：2021-12-27
申请人： 安徽工程大学
摘要： 本发明涉及遗传工程技术领域，具体涉及一种调节大肠杆菌菌膜形态和高效合成MK‑7的方法，包括如下步骤：步骤一、以大肠杆菌BL21基因组为模板，构建得到△ispB菌株EC1；步骤二、以枯草芽孢杆菌168全基因组为模板，扩增得到hepT基因，通过与pET‑28a载体连接构建得到菌株EC2；步骤三、根据待突变LsrR的氨基酸位点来设计PCR点突变引物，以构建的重组质粒pET‑lsrR为模板，构建得到菌株EC3；步骤四、根据待突变lsrK的氨基酸位点来设计PCR点突变引物，构建得到用于高效合成MK‑7的菌株EC4。本发明通过调控大肠杆菌菌膜形态，促进大肠杆菌维生素K2的MK‑7高效合成。
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公开(公告)号：CN112921048A
公开(公告)日：2021-06-08
申请号：CN202110244068.4
申请日：2021-03-05
申请人： 安徽工程大学
摘要： 本发明提供了一种纳豆激酶工程菌及提高纳豆激酶活力的方法，包括如下步骤：步骤一、分别提取枯草芽胞杆菌与纳豆芽胞杆菌的基因组DNA；步骤二、以转录调控因子sinR和纳豆激酶编码基因aprN为目的基因，以枯草芽胞杆菌与纳豆芽胞杆菌的DNA为模板，分别设计第一引物对和第二引物对进行PCR扩增，以得到sinR PCR产物和aprN PCR产物；步骤三、以sinR PCR产物和aprN PCR产物构建串联sinR与aprN的重组质粒；步骤四、将重组质粒转化感受态细胞，以得到阳性克隆菌落；步骤五、对阳性克隆菌落依次进行种子培养基培养和发酵培养。本发明将群体感应调控因子与纳豆激酶编码基因串联表达，提高纳豆激酶含量及活力。
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公开(公告)号：CN114874965B
公开(公告)日：2023-04-14
申请号：CN202210669937.2
申请日：2022-06-14
申请人： 安徽工程大学
摘要： 本发明涉及分子生物学及代谢工程技术领域，具体涉及一种枯草芽孢杆菌工程菌及其构建方法和应用，构建方法包括如下步骤：步骤一、构建表达菌株BU12；步骤二、构建得到启动子PD8；步骤三、将表达菌株BU12中的级联信号分子PhrG和RapG的天然启动子替换为组成型启动子Phag，以构建得到BC01菌株；步骤四、将BC01菌株capB,C,A和racE的启动子中至少两种启动子替换为所述启动子PD8，构建得到枯草芽孢杆菌工程菌。采用本发明的枯草芽孢杆菌工程菌进行发酵调控培养，最终得到聚‑γ‑谷氨酸和D型谷氨酸单体含量皆较高，为拓宽聚‑γ‑谷氨酸在药物输送材料方面的市场应用奠定了坚实的基础。
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公开(公告)号：CN114874965A
公开(公告)日：2022-08-09
申请号：CN202210669937.2
申请日：2022-06-14
申请人： 安徽工程大学
摘要： 本发明涉及分子生物学及代谢工程技术领域，具体涉及一种枯草芽孢杆菌工程菌及其构建方法和应用，构建方法包括如下步骤：步骤一、构建表达菌株BU12；步骤二、构建得到启动子PD8；步骤三、将表达菌株BU12中的级联信号分子PhrG和RapG的天然启动子替换为组成型启动子Phag，以构建得到BC01菌株；步骤四、将BC01菌株capB,C,A和racE的启动子中至少两种启动子替换为所述启动子PD8，构建得到枯草芽孢杆菌工程菌。采用本发明的枯草芽孢杆菌工程菌进行发酵调控培养，最终得到聚‑γ‑谷氨酸和D型谷氨酸单体含量皆较高，为拓宽聚‑γ‑谷氨酸在药物输送材料方面的市场应用奠定了坚实的基础。
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