本发明公开一种鸡新城疫禽流感二联疫苗的制备方法，其包括：(1)提供MDCK悬浮细胞，并培养传代；(2)在培养传代后的MDCK细胞中加入1～5mg/L的地塞米松和2～8mg/L依达拉奉，得到鸡新城疫培养基；将鸡新城疫病毒接种至所述鸡新城疫培养基，培养得到新城疫病毒液；(3)在培养传代后的MDCK细胞中加入1～6g/L的超滤过的酶消化产物，得到禽流感培养基；将禽流感病毒接种至所述禽流感培养基，培养得到禽流感病毒液；(4)将所述新城疫病毒液、禽流感病毒液灭活，并与辅料混合，得到鸡新城疫禽流感二联疫苗。本发明的制备方法简化了病毒繁殖培养工艺，提高了病毒滴度，进而得到的抗体效价高，攻毒保护效果好。