本发明公开了一种用于LPP单基因敲除或突变的大肠杆菌分泌表达短肽类蛋白的发酵培养基及应用。该发酵培养基包括：柠檬酸2.55‑3.4g/L、七水硫酸镁3.5‑4.5g/L、有机氮源15‑36g/L、甘油4.5‑5.5g/L、无水磷酸二氢钾13‑14g/L、无水磷酸氢二铵8‑9g/L、维生素B14‑5 mg/L，微量元素0.8‑1.2mL/L。该发酵培养基克服了突变菌株的生长缺陷，使得菌株能够更好的生长，生长速率达到野生菌水平，实现高密度培养；能显著促进短肽类蛋白的分泌表达，诱导后菌株密度稳定持续增长，发酵周期达40小时，发酵培养基中的目的蛋白得到持续累积。