本发明提供了一种具有拮抗幽门螺旋杆菌粘附活性的玉米蛋白水解物及其制备方法和应用，属于生物活性肽技术领域。本发明提供的玉米蛋白水解物经由如下步骤制备所得：将预处理后的玉米黄粉用蛋白酶水解，得酶解物，将酶解物进行灭酶处理后取上清液，纳滤、干燥得玉米蛋白水解物。本发明提供的玉米蛋白水解物具有拮抗幽门螺旋杆菌粘附人胃粘膜上皮细胞功能，能够显著抑制幽门螺旋杆菌释放的脲酶活性，减少幽门螺旋杆菌在人胃部的定植量。体内动物试验表明，本发明玉米蛋白水解物不仅可有效降低小鼠胃部幽门螺旋杆菌的定植数量，还能降低胃部氧化应激水平、减少炎症因子产生，同时可减缓由幽门螺旋杆菌感染产生的胃部炎症反应。