本发明提供了一种蜈蚣配方颗粒特征图谱及其构建方法和应用，所述构建方法包括以下步骤：(1)将蜈蚣药材与水混合煎煮，之后超声、过滤，得到对照药材参照物溶液；(2)将蜈蚣配方颗粒与水混合超声，得到供试品溶液；(3)将对照药材参照物溶液，供试品溶液分别进行UPLC检测，根据检测结果筛选出保留时间一致且峰形好、分离度高的峰为特征峰，并在特征峰中选择成分确定、峰形较好的为S峰，计算其他特征峰相对S峰的相对保留时间，即得到蜈蚣配方颗粒特征图谱。本发明提供的构建的特征图谱重复性好，精密度高，稳定性好，能够对蜈蚣配方颗粒进行有效的质量鉴定。