本发明提供了核桃乙酰胆碱酯酶抑制肽及其应用。本发明所述核桃乙酰胆碱酯酶抑制活性肽FR、SF、LR结构清晰明了，可通过现有技术固相化学合成方法获得。本发明通过限制性酶解结合质谱和计算机模拟方法筛选出高乙酰胆碱酯酶活性多肽，不仅可以降低人工成本，减轻工作强度，缩短开发周期，而且可以大大提高目标生物活性肽的制备成功率。本发明的乙酰胆碱酯酶抑制活性肽具有较好的乙酰胆碱酯酶抑制活性，具有潜在的改善记忆的功效，既能够单独用于制备改善记忆药物或改善记忆保健品，也能够与现有技术的改善记忆相关物质复配使用，以便取得更好的协同改善记忆的效果。