本发明属于基因检测领域，具体涉及一种检测人类家系及孕妇胎儿游离DNA的Rh血型基因型的引物探针组、试剂盒及其应用。本发明利用ARMS+Sequence Specific High‑BLocker（SSHB），结合特定的反应程序的方法，检测孕妇(RhD基因纯合缺失型)外周血胎儿cffDNA基因分型。本发明中利用探针熔解曲线的方法开发出的RhD基因分型检测体系只需要1ng DNA核酸样本、1管qPCR就可以检测新生儿、成人（包含已孕夫妇）的RhD基因分型，可以为血清学检测结果为Rh阴性的孕妇进行初筛，确定是否可以做孕血胎儿无创RhD基因分型检测。