本发明属于药物分析技术领域，具体涉及一种同时检测重酒石酸去甲肾上腺素中API游离碱与配对有机酸的HPLC检测方法。该检测方法为：采用二羟丙基键合相的亲水相互作用色谱柱，以磷酸盐和乙酸铵混合液为强洗脱流动相，以乙腈为弱洗脱流动相，以强洗脱流动相:弱洗脱流动相＝20:80，v/v，进行等度洗脱，所述强洗脱流动相为5mM磷酸二氢钾和10mM乙酸铵，并用乙酸调节pH至4.4～4.5；其色谱条件：流动相流速为0.9～1.1mL/min；色谱柱温度为30～45℃；检测器所用紫外检测器，检测波长为210～220nm。该检测方法操作简单、成本低，能够同时分离游离碱和有机酸，二者之间的分离度远大于2.0，且游离碱和有机酸的峰型良好，拖尾因子均在0.8～1.5之间，为产品的研发和生产提供了简便、稳定、可靠的分析检测方法。