本发明涉及一种烯酮还原酶及其制备方法与应用，属于生物技术领域。本发明提供了一种烯酮还原酶，所述烯酮还原酶的氨基酸序列如SEQ ID NO：3所示；所述烯酮还原酶能够以β‑紫罗兰酮为底物高效催化合成二氢‑β‑紫罗兰酮，具有催化专一性高，产物转化率高，反应副产物少，反应时间短等优势；所述烯酮还原酶的最佳反应条件为：4.0U/mL的酶浓度、1mM的底物β‑紫罗兰酮浓度、1mM的辅酶因子NADH浓度、6.0的反应pH、60℃的反应温度、30min的反应时间；在该最佳反应条件下，所述烯酮还原酶(KaDBR1)在30min内可以产生0.98mM的二氢‑β‑紫罗兰酮，转化率为98.0％。