本发明属于生物医学检验技术领域，具体涉及一种基于荧光定量PCR技术的结直肠癌多基因甲基化联合检测试剂盒及其临床应用。本发明通过联合检测外周血单个核细胞中TRGV9、TRDJ3、TRDC、FAM174B、ZMIZ2基因甲基化水平，能够有效判断结直肠癌的发生情况。与焦磷酸测序等技术相比，本发明操作简便，大大降低检测成本，提高检测效率，可在基层医院开展，有望实现对结直肠癌进行高灵敏度、高特异性的筛查诊断，具有较高的临床使用和推广价值。