基于比率荧光和滚环扩增的piRNA体外检测方法

    公开(公告)号:CN115058495B

    公开(公告)日:2024-05-28

    申请号:CN202210650270.1

    申请日:2022-06-10

    申请人: 山东大学

    IPC分类号: C12Q1/6844 C12Q1/6886

    摘要: 本发明属于生物检测技术领域,涉及一种基于Atto‑425和Au NCs/UiO‑66‑NH2的比率荧光和滚环扩增的piRNA体外检测方法。其中Atto‑425具有荧光报告作用,Au NCs具有荧光参考作用,UiO‑66‑NH2起到负载Au NCs以及吸附未结合荧光报告子的作用。该方法包括以下步骤:制备Au NCs/UiO‑66‑NH2,将待测样本溶液加至含有环状模板的溶液中,于95℃孵育5 min,然后向上述溶液中加入DNA连接酶30℃孵育1 h连接环状模板,灭活连接酶后加入DNA聚合酶于30℃孵育4 h进行滚环扩增,灭活聚合酶后加入荧光报告子于30℃孵育1.5 h,最后加入Au NCs/UiO‑66‑NH2静置30 min,用荧光分光光度计测试上述混合溶液的(F‑F0)485/F625并计算出待测piRNA的浓度。本发明操作简便、灵敏度高、特异性好、准确度高,是一种用于piRNA体外检测的可靠方法。

    一种用于结直肠癌诊断的多基因DNA甲基化联合检测试剂盒及应用

    公开(公告)号:CN116064792A

    公开(公告)日:2023-05-05

    申请号:CN202210962887.7

    申请日:2022-08-11

    申请人: 山东大学

    摘要: 本发明属于生物医学检验技术领域,具体涉及一种基于荧光定量PCR技术的结直肠癌多基因甲基化联合检测试剂盒及其临床应用。本发明通过联合检测外周血单个核细胞中TRGV9、TRDJ3、TRDC、FAM174B、ZMIZ2基因甲基化水平,能够有效判断结直肠癌的发生情况。与焦磷酸测序等技术相比,本发明操作简便,大大降低检测成本,提高检测效率,可在基层医院开展,有望实现对结直肠癌进行高灵敏度、高特异性的筛查诊断,具有较高的临床使用和推广价值。

    基于光电化学和双链特异性核酸酶的体外piRNA检测方法

    公开(公告)号:CN114965645B

    公开(公告)日:2022-12-09

    申请号:CN202210650585.6

    申请日:2022-06-10

    申请人: 山东大学

    摘要: 本发明属于生物检测技术领域,涉及一种基于光电化学和双链特异性核酸酶的体外piRNA检测方法。该方法包括以下步骤:制备MoS2@ReS2/Ti3C2光活性复合材料以及SiO2复合探针系统,组装传感器。滴加待测样本,与DSN室温反应完成后,用超纯水将样本冲洗在抗坏血酸电解质溶液中进行PEC测量。MoS2@ReS2的Ⅰ型异质结构以及Ti3C2的高电导率有利于抑制电子‑空穴对的复合,提高靶响应;在piR‑31143存在时,piR‑31143会启动链置换反应将p2从复合探针系统中置换出来,随后DSN酶特异性识别DNA‑RNA复合体,裂解p1探针并释放piR‑31143继续参与下一轮置换及切割反应,形成恒温信号放大。本发明操作简便、灵敏度高、重复性和特异性好,是一种用于piRNA体外检测的可靠方法,基于此方法可以实现结直肠癌的精准诊断。