本发明提供了一种基于质谱仪测定氢同位素中氦气含量的方法。所提供的方包括：(1)应用质谱仪对国家标准物质标准氢进行第一检测，以便标定氢气灵敏度，计为S1；(2)应用质谱仪采用国家标准物质标准氦进行第二检测，以便标定氦气灵敏度，计为S2；(3)根据S1和S2，确定氦气校正系数△＝S2/S1；(4)基于氦气校正系数，应用质谱仪对不同浓度配比的混合气中的氦气含量进行检测，将所获得的氦气含量的检测结果与混合气中氦气的理论值进行拟合，获得标准曲线；(5)利用质谱仪对待测气体进行检测，并基于标准曲线确定待测气体中氦气的含量。所提供的方法可以实现氦气含量的测定，准确性高，适用性强，适用范围广。