本发明公开了一种多重胁迫抗性增强的重组酿酒酵母菌及其构建方法与应用，属于生物工程技术领域。本发明通过对具有耐盐性的鲁氏酵母菌(Zygosaccharomyces rouxii 3791)克隆控制不饱和脂肪酸合成的去饱和酶的基因(OLE1)或(FAD2)，通过连接到能在酿酒酵母中高拷贝双向表达质粒pY15TEF‑1，转化酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae CEN.PK2‑1C)，获得耐盐性、耐酸性、耐热性和耐冷性能均得到提升的酿酒酵母基因工程菌。