本发明公开了一种基于纳米抗体‑单抗夹心检测新型冠状病毒受体结合区蛋白的均相方法，涉及抗原检测领域。构建了新型冠状病毒RBD蛋白、纳米抗体的表达载体进行蛋白表达，ELISA法鉴定纳米抗体与单克隆抗体的配对性能，将纳米抗体与单克隆抗体分别偶联至荧光微球和磁性纳米微球的表面，使用PBS缓冲液将新型冠状病毒RBD蛋白稀释为不同浓度，投入靶向RBD蛋白的荧光及磁性纳米探针，磁力架分离并测定其荧光值，建立检测新型冠状病毒RBD蛋白的标准曲线，最低检测线为0.09ng/mL。本发明构建的免疫荧光均相法操作简单、检测速度快、步骤少、成本低廉、适用于多种场景检测，为新型冠状病毒快速检测试剂盒的开发奠定了基础。