本发明涉及用于烟草中痕量糯米香特征关键香气化合物的鉴定方法，以具有典型糯米香韵特色的烤烟烟叶为研究试材，首先通过感官导向的GCO技术定位到烟叶中糯米香关键气味组分，通过色谱信息和气味信息对其初步定性的基础上，利用多维色谱‑高分辨质谱分析可能目标物标准品，获取该靶向目标化合物的高准确度、高分辨质谱图，依据标准品一维和二维出峰时间、高分辨特征离子有无及特征离子丰度比等信息，成功在烟叶中检出糯米香特征成分信号响应，并将该痕量、高效的糯米香特征组分准确鉴定为2‑乙酰基‑1‑吡咯啉。糯米香特征关键未知组分的定性解决了“因缺少明确靶向分子，很难实现烟草‘糯米香’香气特征品质客观评价和精准调控”的技术难题。