本发明涉及羊毛甾醇的制备技术领域，公开了一种米曲霉工程菌，所述米曲霉工程菌体内携有表达质粒pRA‑HMGR‑GLLS，其中：HMGR为3‑羟基‑3‑甲基戊二酰辅酶A还原酶编码基因片段，核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示；GLLS为羊毛甾醇合酶编码基因片段，核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示。本发明的米曲霉工程菌株可以大米为底物发酵，生产羊毛甾醇，羊毛甾醇产量超过189 mg/1Kg大米，培养周期短、分离纯化简单易行，非常适合大规模发酵生产，可为含有羊毛甾醇骨架结构的天然产物以及相关医药中间体的合成提供充足的原料。