一种菌丝霉素二聚体及其制备方法

    公开(公告)号:CN118420732B

    公开(公告)日:2024-10-22

    申请号:CN202410898183.7

    申请日:2024-07-05

    摘要: 本申请涉及基因工程技术领域,特别涉及一种菌丝霉素二聚体及其制备方法。制备方法包括步骤:基于如SEQIDNo.3所示的核苷酸序列,构建线性化的pPIC9K‑h(Ple)2质粒;制备GS115感受态细胞,并将所述pPIC9K‑h(Ple)2质粒电转化至所述GS115感受态细胞,进行培养和阳性转化子筛选,获得重组酵母菌;将所述重组酵母菌进行发酵培养,收集培养上清液;对所述培养上清液进行纯化,得到菌丝霉素二聚体。本发明提供的菌丝霉素二聚体,是在菌丝霉素蛋白序列SEQIDNo.1的基础上设计的反向平行二聚体(Ple)2。同时本发明利用基因工程技术重组表达菌丝霉素二聚体,获得高表达量菌株和高稳定性的菌丝霉素二聚体。

    无痕基因整合的乳酸乳球菌及构建方法

    公开(公告)号:CN118773231A

    公开(公告)日:2024-10-15

    申请号:CN202411041093.2

    申请日:2024-07-31

    摘要: 本发明公开了无痕基因整合的乳酸乳球菌及构建方法,步骤为:将乳酸乳球菌基因整合位点上游同源臂、待整合基因X和下游同源臂连接在质粒骨架pSynUC57上,得到质粒pSynUC57‑INX,并电转入乳酸乳球菌获得一次重组菌1;制备质粒pNZts‑PnisA‑I‑sceI;并电转入一次重组菌1,获得一次重组菌2;添加nisin诱导I‑sceI表达,通过菌落PCR筛选二次重组菌,即含有温敏质粒pNZts‑PnisA‑I‑sceI的无痕基因整合菌;高温培养消除温敏质粒,得到无痕基因整合的乳酸乳球菌;本发明无需提前敲除基因以获得缺陷型菌株;操作简单,只需要使用菌株常用培养基,无痕基因整合效率超过90%。