本发明公开了一种同步检测22种手足口病毒的检测引物探针组合及基因芯片，涉及病毒检测技术领域。22种手足口病毒包括13种柯萨奇病毒、1种肠道病毒和8种埃可病毒，检测引物组合的核苷酸序列如SEQ ID NO.1～20所示。本发明提供的引物组合及探针组合具有检测手足口病的病原体的类型多(达22种)，范围广，准确度高的优势。利用设计的引物和探针制备的基因芯片和基因检测试剂盒仅通过一次试验就能同时检测22种手足口病毒。本发明提供的试剂盒不仅特异性好、灵敏度高，而且检测时间短、成本低、操作方便，对开展手足口病毒的临床筛查和辅助诊断具有重大的意义。可以在社区手足口病毒检测和院内病原体感染的场景中使用。