本发明提供了一种CLEC9A+XCR1+树突状细胞的制备方法，该制备方法包括如下步骤：在含有CD40信号激活剂的培养体系中，在体外将PBMC诱导分化为CLEC9A+XCR1+树突状细胞。其中，CD40信号激活剂为重组人CD40配体，优选重组人CD40L三聚体活性单位。培养体系还包括α‑MEM、RPMI‑1640、IMDM中的一种，加入1×β‑巯基乙醇、1×胰岛素‑转铁蛋白‑硒‑乙醇胺添加剂、重组人Flt3配体蛋白、重组人干细胞因子、重组人血小板生成素、重组人粒细胞‑巨噬细胞集落刺激因子、重组人白介素4蛋白以及自体血浆或重组人血白蛋白。本发明提供的CLEC9A+XCR1+树突状细胞的制备方法，能够在体外诱导分化CLEC9A+XCR1+树突状细胞，可获得纯度20％以上的CLEC9A+XCR1+树突状细胞。