本发明公开了一种表面展示脂肪酶的肉葡萄球菌及构建方法和应用。所述表面展示脂肪酶的肉葡萄球菌为含有重组质粒pBT2‑SPP‑LIP‑CBD‑XM的S.carnosus TM300菌株。利用纤维素进行细胞固定化后，细胞表面展示的脂肪酶最适温度可达45℃，比游离细胞的脂肪酶更能够耐受高温，并且在40℃保温3h后仍能保留80％左右的酶活，温度稳定性较好。另外，本申请构建得到的S.carnosus TM300/P‑SPP‑LIP‑CBD‑XM重组菌株能够用于生产生物柴油，生物柴油转化率能够达到77％。本申请为生物柴油的制备提供了新思路和有应用价值的实验材料，具有较好的应用前景。