本发明属于病毒免疫检测技术领域，具体涉及一种同时检测非洲猪瘟病毒CD2v和p54抗体的双联胶体金免疫层析试纸条及其制备方法。本发明首先获得了非洲猪瘟病毒CD2v重组蛋白和p54重组蛋白，并用于胶体金免疫层析检测体系的构建。本发明进一步使用金黄色葡萄球菌A进行胶体金标记，以胶体金作为标记示踪物，制备了抗体检测胶体金免疫层析试纸条，所述试纸条包括支撑底板，在支撑底板上按顺序依次固定有样品垫、金标蛋白垫、层析检测膜和吸水垫。所述是试纸条利用抗原抗体反应和侧向层析方法对样品进行检测，标记后的复合物和抗体结合稳定，颜色鲜明、肉眼可见，在抗体检测方面，极具优势，提高了检测的灵敏度，降低了非特异反应以及漏检率。